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PI细胞周期与凋亡试剂盒

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产品编号 FY600002
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FY600002-20T20 TEST176
FY600002-50T50 TEST426
FY600002-100T100 TEST806


暑假促销,活动期间四折优惠,欢迎订购!试用产品须联系确认后方可下单!!


产品简介:

本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。

在正常细胞周期中,G0G1期有1套染色体,G2M期细胞有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度不同。假定G0G1期的细胞荧光强度为1,那么G2M期的细胞的荧光强度为2S期的细胞介于12之间。

细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本产品可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。

 

自备耗材和设备:

1 ml 移液器

100-200 μl 移液器

旋窝混匀仪

流式细胞仪

PBS

75%乙醇

适用实验与操作过程:

1. 细胞准备-

贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。

悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。

组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。

注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。

 

2. 细胞固定

细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。

 

3. 染色

PI染色工作液配置:0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI染液(A液)和10 μl RNase AB液),混匀待用。每个细胞样品加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激发波长为488 nm,检测红色荧光。

注意:每个检测细胞数不超过1×106个。


产品说明书下载 


PI细胞周期与凋亡试剂盒产品说明书


 产品编号:

FY600002-20T

FY600002-50T

FY600002-100T

存储条件:

2-8 ℃避光 保存,有效期2个月;

-20 ℃避光保存,有效期12个月;

避免反复冻融。

 

产品简介:

本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。

在正常细胞周期中,G0G1期有1套染色体,G2M期细胞有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度不同。假定G0G1期的细胞荧光强度为1,那么G2M期的细胞的荧光强度为2S期的细胞介于12之间。

细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本产品可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。

 

自备耗材和设备:

1 ml 移液器

100-200 μl 移液器

旋窝混匀仪

流式细胞仪

PBS

75%乙醇

适用实验与操作过程:

1. 细胞准备

贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。

悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。

组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。

注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。

 

2. 细胞固定

细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。

 

3. 染色

PI染色工作液配置:0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI染液(A液)和10 μl RNase AB液),混匀待用。每个细胞样品加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激发波长为488 nm,检测红色荧光。

注意:每个检测细胞数不超过1×106个。

 



注意事项与常见问题:

 1. 是否需要防护?

PI具有毒性,操作时应注意防护,保护眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。

2. 是否需要避光?

PI存在淬灭现象,保存和使用过程中注意避光。

3. 单个反应的细胞数量是否有要求?

推荐细胞数量105 - 106个之间。若细胞数量太低,流式细胞仪分析时会花费时间更长,同时得到数据在统计上可能会有偏差。细胞数量太高,对于流式细胞仪分析没有必要,同时操作过程中可能有不便之处;且该方法要求PI的过饱和,细胞数量过大会导致检测不准确。

4. 使用时需及时清洗流式细胞仪。

PI流式上机时具有一定的粘性,请及时清洗流式细胞仪,避免堵塞。连续上机数量过多也可能导致仪器堵塞导致数据误差,可在检测到一定数量的样本时进行次氯酸清洗,然后进行剩余样本的检测。


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