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产品简介: 本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。 在正常细胞周期中,G0和G1期有1套染色体,G2和M期细胞有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为1,那么G2和M期的细胞的荧光强度为2,S期的细胞介于1和2之间。 细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。 细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。 本产品可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。
自备耗材和设备: 1 ml 移液器 100-200 μl 移液器 旋窝混匀仪 流式细胞仪 PBS 75%乙醇 适用实验与操作过程: 1. 细胞准备- 贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。
2. 细胞固定 细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。
3. 染色 PI染色工作液配置:0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI染液(A液)和10 μl RNase A(B液),混匀待用。每个细胞样品加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激发波长为488 nm,检测红色荧光。 注意:每个检测细胞数不超过1×106个。 引用文献: Li M, Li X, Chen S, Zhang T, Song L, Pei J, Sun G, Guo L. IPO5 Mediates EMT and Promotes Esophageal Cancer Development through the RAS-ERK Pathway. Oxid Med Cell Longev. 2022 Sep 9;2022:6570879. doi: 10.1155/2022/6570879. PMID: 36120598; PMCID: PMC9481360. PI细胞周期与凋亡试剂盒产品说明书 产品编号: FY600002-20T FY600002-100T 存储条件: 2-8 ℃避光 保存,有效期2个月; -20 ℃避光保存,有效期12个月; 避免反复冻融。
产品简介: 本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。 在正常细胞周期中,G0和G1期有1套染色体,G2和M期细胞有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为1,那么G2和M期的细胞的荧光强度为2,S期的细胞介于1和2之间。 细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。 细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。 本产品可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。
自备耗材和设备: 1 ml 移液器 100-200 μl 移液器 旋窝混匀仪 流式细胞仪 PBS 75%乙醇 适用实验与操作过程: 1. 细胞准备 贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。 注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。
2. 细胞固定 细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。
3. 染色 PI染色工作液配置:0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI染液(A液)和10 μl RNase A(B液),混匀待用。每个细胞样品加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激发波长为488 nm,检测红色荧光。 注意:每个检测细胞数不超过1×106个。
1. 是否需要防护? PI具有毒性,操作时应注意防护,保护眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。 2. 是否需要避光? PI存在淬灭现象,保存和使用过程中注意避光。 3. 单个反应的细胞数量是否有要求? 推荐细胞数量105 - 106个之间。若细胞数量太低,流式细胞仪分析时会花费时间更长,同时得到数据在统计上可能会有偏差。细胞数量太高,对于流式细胞仪分析没有必要,同时操作过程中可能有不便之处;且该方法要求PI的过饱和,细胞数量过大会导致检测不准确。 4. 使用时需及时清洗流式细胞仪。 PI流式上机时具有一定的粘性,请及时清洗流式细胞仪,避免堵塞。连续上机数量过多也可能导致仪器堵塞导致数据误差,可在检测到一定数量的样本时进行次氯酸清洗,然后进行剩余样本的检测。
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