Professional Stem Cell Media

产品
  • 产品
搜索

干细胞培养基供应商

弗元生物-专业的干细胞培养基 >> 产 品 >>类器官培养基 >> 定型内胚层高效分化试剂盒
详细说明

定型内胚层高效分化试剂盒


适用于人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞向定型内胚层分化(分化效率大于90%)。


销售价
¥6985
微信联系
 
市场
17621586186
公司
021-80370389
收藏
产品编号 RC200123
  • 商品说明
  • 商品参数
货号产品名称目录价(元)
RC200123定型内胚层高效分化试剂盒6985


产品名称

定型内胚层高效分化试剂盒

货号

RC200123

适用范围

适用于人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞向定型内胚层分化(分化效率大于 90%)

产品特性

针对定型内胚层分化问题优化,成分确定且无血清,降低诱导过程细胞死亡率,诱导后流式   / 免疫荧光检测定型内胚层细胞标志物 SOX17 及   FOXA2 阳性率大于 90%

试剂组成

完全培养基(100ml,货号   RC200123,存储于 - 80℃)

有效期

试剂盒于 - 80℃保存,有效期   1 年;融化后的完全培养基于 2 - 8℃稳定储存 1 -   2 周

操作方法

  1.  完全诱导培养基准备:室温解冻,融化后摇匀分装, - 80℃保存,避免反复冻融;使用前室温复温,操作需无菌。

  2. 待分化细胞接种:分化前一天消化接种 hESCs/iPSCs,确保分化开始时细胞汇合度大于 90%,建议 hESCs/iPSCs 复苏后传代 3 次调整状态,可参考相关产品说明书。

  3. 诱导起始:弃去培养上清,用完全诱导培养基洗涤后按参考量加入,放入培养箱培养,注意培养基复温及洗涤要求。

  4. 换液诱导:诱导 24 小时后观察换液,每天换液至 72 小时,诱导培养会筛选细胞,细胞死亡正常,诱导培养基使用前需复温。

  5. 标志物检测:72 小时诱导后,细胞汇合度大于 80%,流式检测 SOX17 阳性率大于 90%,诱导终点细胞需尽快进入后续实验。

  6. 注:具体操作参考产品说明书和官方提供的技术资料。

特别提示

所有操作在无菌细胞培养室和生物安全柜内进行;培养器皿可按需选择;保证多能干细胞初始未分化状态;试剂盒仅用于多能干细胞向定型内胚层分化研究,操作规程仅供参考



细胞形态展示:

RC200123 -1.jpg


鉴定结果:

RC200123 -2.jpg

 

应用示例:

1.        人胚胎干细胞源肺类器官分化


RC200123 -3.jpg 

 

2.        人胚胎干细胞源肝细胞分化

RC200123 -4.jpg

参考文献

1.         Chen, Y; Feng, J; Zhao, S; Han, L; Yang, H; Lin, Y; Rong, Z; Long-Term Engraftment Promotes Differentiation of Alveolar Epithelial Cells from Human Embryonic Stem Cell Derived Lung Organoids, Stem cells and development, 2018, 27(19): 1339-1349.

2.         Li, Q; Hutchins, A. P; Chen, Y; Li, S; Shan, Y; Liao, B; Zheng, D; Shi, X; Li, Y; Chan, W; Pan, G; Wei, S; Shu, X; Pei, D; A sequential EMT-MET mechanism drives the differentiation of human embryonic stem cells towards hepatocytes, Nature communications, 2017, 8(1): 1-12.


定型内胚层高效分化试剂盒

仅用于科学研究

产品信息

产品名称:定型内胚层高效分化试剂盒

货号:RC200123

批号:见包装

试剂清单:

序号

名称

数量

货号

存储

1

完全培养基

100 ml ×1

RC200123

-80 

存储与有效期:

该试剂盒于-80 ℃保存。所有组分必须避免反复冻融,在-80 ℃有效期为1年。融化后的完全培养基于2-8 ℃保存,稳定储存1-2周。

适用细胞:

适用于人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞向定型内胚层分化(分化效率大于90%)。

产品介绍

人多能干细胞(human pluripotent stem cellshPSCs)包括人胚胎干细胞(hESCs)和诱导性多潜能干细胞(iPSCs)。体外hPSCs定向肝细胞、肺细胞、胰岛细胞等方向分化均需要先分化为定型内胚层细胞(definitive endoderm cells)。定型内胚层经典的分化方法用时3天,因分化过程中添加高浓度的活化素A100 ng/mlActivin A),会导致分化的同时细胞大量死亡。为提高细胞存活率,通常会添加一定浓度的血清。但血清成分复杂,提高细胞存活率的同时也严重影响分化效率(使用血清后流式检测定型内胚层细胞标志物SOX17FOXA2往往低于50%)。这也最终导致肝细胞、肺细胞、胰岛细胞等终末分化细胞分化效率更低,难以满足下游实验的需求。本产品主要针对定型内胚层分化过程中细胞大量死亡和血清导致的分化效率低下进行产品优化,最终形成了成分确定且无血清的改良配方,明显降低了诱导过程中的细胞死亡率,且诱导后流式/免疫荧光检测定型内胚层细胞标志物SOX17FOXA2阳性率大于90%

操作方法

实验准备

完全诱导培养基准备:

1.      完全诱导培养基解冻:室温解冻完全诱导培养基(RC200123)。融化后轻轻充分摇匀,分装或直接以使用。分装后立即存储于-80 ℃,避免反复冻融。

注意:室温解冻有利于保护培养基中营养物质不被破坏,切不可置于37℃水浴剧烈解冻,解冻后请务必充分混匀,以保证成分的均匀。

2.      使用前准备:完全诱导培养基使用前必须进行室温复温。

注意:解冻后的完全诱导培养基必须充分混匀,2-8℃保存。整个过程确保无菌操作,试剂开封前以75%酒精擦拭表面。完全诱导培养基使用前置于室温环境复温,该操作适用于所有用到完全诱导培养基的步骤。

自备试剂:

l  多能干细胞完全培养基

l  细胞消化液

l  无钙镁的磷酸盐缓冲液(DPBS

操作方法

1.        待分化细胞接种:分化前一天消化,接种hESCs/iPSCs。以24孔板进行诱导分化为例,确保分化开始加入完全诱导培养基时细胞汇合度大于90%,细胞贴壁时间大约为12-16小时。

注意:hESCs/iPSCs 复苏后状态较差,建议传代数次调整细胞状态后种板开始诱导分化,建议传代3次后开始种板诱导分化。细胞状态和细胞培养中需要注意的细节,细胞消化、离心时间等可参考多能干细胞相关产品(RC200120RC200121RC200111)的产品说明书。

2.        诱导起始:弃去培养上清,用完全诱导培养基轻柔地洗涤细胞2次。按照培养器皿的参考培养基添加量加入完全诱导培养基。将器皿放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱进行培养。完全诱导培养基的参考添加量为24孔板500 μl/孔、6孔板2 ml/孔、10 cm培养皿15 ml/皿。

注意:再次特别提醒完全诱导培养基使用之前必须复温。加入完全诱导培养基之前必须经过完全诱导培养基洗涤,否则会影响细胞分化。洗涤时尽量完全去除胚胎干细胞的培养基残留,建议洗涤体积24孔板1 ml/孔、6孔板2 ml/孔、10 cm培养皿8 ml/皿。

3.        换液诱导:诱导24小时后,倒置显微镜观察细胞。更换新鲜完全诱导培养基。将器皿放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱继续培养。每天换液,继续诱导至72小时。

注意:诱导培养会对细胞进行筛选,细胞死亡为正常现象。经过72小时诱导后,细胞汇合度应大于80%。诱导培养基使用之前必须复温,提前室温放置复温即可,切不可37℃水浴复温。

4.        标志物检测:经过72小时诱导,细胞汇合度大于80%。定型内胚层细胞呈三角形或多角形,流式细胞术检测SOX17阳性率应大于90%

注意:该诱导终点只是其他实验的起点,诱导终点的细胞难以长时间稳定在该状态,需要尽快进入后续实验(大于72小时细胞会出现凋亡,因此需要每天固定时间点进行实验),如肝脏细胞、胰岛细胞、肺细胞等的诱导分化程序等。

特别提示:以上所有操作均在无菌细胞培养室进行,细胞开放操作要在生物安全柜内进行;该研究常用的培养器皿包括培养皿、培养板,也可自行设计方案使用细胞培养瓶、细胞工厂等,请根据实验需要自行选择;多能干细胞的初始状态对分化的成功至关重要,请务必保证初始细胞未分化。该试剂盒仅用于多能干细胞向定型内胚层分化的研究,用于其他研究时该操作规程仅作为参考。

 

 


  • 电话直呼

    • 021-80370389
    • 17621586186
    • 13671816350
    • 13041694656
    • 产品订购1 :
    • 产品订购2 :
    • 技术服务1 :
    • 技术服务2 :
    • 技术服务3 :
  • 微信联系

技术支持: zqjq | 管理登录
×
seo seo