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弗元生物-再生医学培养基 >> 产 品 >>SNP试剂盒 >> 人CYP2C19基因多态性检测试剂盒(rs4244285)
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人CYP2C19基因多态性检测试剂盒(rs4244285)

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产品编号 FYG-rs4244285
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人CYP2C19基因多态性检测试剂盒(rs4244285)


货号

规格

目录价

活动价

FYG-rs4244285-1000T

10ul×1000

3600

3420

FYG-rs4244285-2000T

10ul×2000

6400

5760


产品编号:

FYG-rs4244285-500T

FYG-rs4244285-1000T

FYG-rs4244285-2000T


存储条件:

2-8 保存,有效期1周;

-20 ℃保存,有效期6个月;

避免反复冻融。

产品组分:

编号

名称

500T

1000T

2000T

A

RealFAST Probe   PCR mix

1.4 ml×2

1.7 ml×3

1.7 ml×6

B

Primer & Probe   premix

0.25 ml×2

0.5 ml×2

0.5 ml×4

C

Lo-ROX50×)

0.1 ml×1

0.1 ml×2

0.1 ml×4

D

ddH2O

1 ml×2

1 ml×3

1 ml×6


 

产品简介:

氯吡格雷用药指导相关CYP2C19基因多态性检测试剂盒(rs4244285、rs4986893、rs12248560)

本产品是基于Taqman MGB探针法开发的SNP分型试剂盒。该试剂盒具有高灵敏度、高区分度、高重复性、抗干扰性强等特征。该试剂盒包含RealFAST Probe PCR mix Lo-ROXPrimer & Probe premix ddH2OSNP分型所需的所有试剂,具有操作简便、分析简单、结果可靠等优点。

 

自备耗材和设备:

2 μl 移液器,10 μl 移液器,100 - 200 μl 移液器;

冰盒;

荧光定量PCR管;

实时荧光定量PCR仪。

反应设置与操作过程:

1. 探针分型:

FAM标记A型;VIC标记G型。

 

2. 反应体系:

PCR反应体系(10 μl):


名称

体积(μl

RealFAST Probe PCR mix

5

Primer & Probe premix

1

Lo-ROX50×)

按机器品牌与型号添加

DNA

110 - 40 ng

ddH2O

补足至10 μl

 

仪器型号对Lo-ROX添加的要求:

仪器

终浓度

ABI PRISM 7000 /7300 /7700 /7900HT /Step One

5×(即:Lo-ROX 1μl /10μl体系)

ABI 7500 /7500 Fast

Stratagene Mx3000P /Mx3005P /Mx4000

1×(即:Lo-ROX 0.2μl /10μl体系)

Roche仪器;

Bio-Rad仪器;

Eppendorf仪器

无需添加

 

反应条件:




项目

温度

时间

循环数

预变性

95

5 min

1

变性

95

10 sec

40

退火/延伸

60

30 sec

 

3. 操作过程:

1.1         试剂准备:试剂盒从-20℃冰箱取出,室温融化;涡旋仪混匀,瞬时离心待用。

1.2         用量计算:根据需要检测的样本数n,配置n+4个反应体系混合液。即5(n+5)μl RealFAST Probe PCR mix(n+5)μl Primer&Probe premix rs??)、0.2(n+5)μl  Lo-ROX50×)、2.8(n+5)μl ddH2O。(若反应数较大,可适当增加几个反应

1.3         反应混合液配制:将上述计算的用量按次序用移液器加入同一新鲜干净的EP管中,涡旋仪混匀,瞬时离心。(若反应数较大,可选用较大EP管。请务必旋窝混匀!

1.4         添加反应混合液:按照每孔9μl的量将配置好的反应体系分装至八联排(96孔板)。

1.5         添加模版:1μl已经定量并稀释至10 - 40 ng/μl DNA模板加入分装的反应体系中。

1.6          添加质控:三种质控质粒中各取1 μl分别加入到反应体系中,构成三个阳性质控;加入1 μl ddH2O与另一反应体系中,构成阴性质控。

1.7         瞬时离心:八联排(96孔板)盖上管盖(或封膜),瞬时离心,使DNA模板与反应体系混合并处于管底。(请务必进行瞬时离心,否则可能出现无扩增的结果!

1.8         上机:将八联排(96孔板)放入ABI7500PCR仪,根据反应条件设置ABI 7500软件,开机运行。(请根据选用的机型进行相关设置

1.9         特别说明:配置体系过程中,需要戴一次性乳胶手套(PE手套);避免接触管盖(或封膜),防止污染,导致荧光信号不准确。阳性质控质粒拷贝数极高,应严格规范操作,防止交叉污染。

 

 


常见问题:

 1. 存储条件与反复冻融如何选择?

该产品-20 ℃条件下可以存储6个月;2-8 ℃可以存储1周。组分ABC均不能反复冻融,融化后不建议再次冻存。

2. 反应体系的确认?

该试剂盒建议反应体系10 μl。若必须使用其他反应体系,建议自行验证后在进行大量样本的检测。

3. 反应条件是否可以改动?

本试剂盒的反应条件根据多种参数确定,并适用于10 μl反应体系,为确保实验数据的准确性,不建议改动。

4. 机器设备的适用与选择?

该试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪,但注意Lo-ROX的添加有所不同,请严格按照说明书执行。

5. 新学习的用户,常常出现无扩增?

该实验为精细实验,对操作要求较高,请注意严格按照说明书执行。尤其是加样、加样后的离心等。为提高实验成功率,可选择加倍反应体系,以20 μl体系进行初步学习。

6. 扩增曲线荧光信号很弱,或扩增曲线呈锯齿状?

这个问题可能有多种原因造成,常见原因及解决办法见下表。

原因

解决办法

检测光谱设定误差

不同荧光定量PCR仪的检测光谱范围有差异,根据所用的仪器型号设置检测的荧光信号范围。

荧光采集时间太短

扩增曲线锯齿状较明显时,将延伸时间设定为45 - 60 sec可得到改善。

目标DNA的拷贝数过少

目标DNA拷贝数只有几倍到几十倍时,容易形成线性混乱,提高样品浓度再进行反应。

样本浓度过低或严重降解

更换高浓度样本或质量更好样本进行实验。

 

 

 


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