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芦凌羽. 黄芩苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制芦凌羽. 黄芩苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制[D].华北理工大学,2021.DOI:10.27108/d.cnki.ghelu.2021.000138. 黄芩苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制芦凌羽华北理工大学摘要:目的对黄芩苷是否有保护糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的作用进行评估并探讨其机制。方法采用随机抽样的方法选取雄性健康大鼠60只,无眼前节和眼底病变,体重在200~220g,空腹血糖处于3~6mmol/L。对其中40只大鼠注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),剩余20只大鼠腹腔注射同体积的生理盐水,并标记为正常模型组(N组)。造模成功后,将其随机平均分成糖尿病模型组(D组)20只,和黄芩苷治疗组(B组)20只,B组给予黄芩苷水溶液(50mg/kg),另外两组大鼠给予生理盐水(50mg/kg)作为对照。在1、4、8、12周时,用血糖仪测量三组大鼠空腹血糖值,并记录。在12周时剔除生理状态差、体重差异大以及死亡的大鼠,于每组里再次随机选取各12只大鼠,共36只大鼠行实验研究。采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察视网膜神经节细胞数量以及视网膜整体形态;采用TUNEL法观察神经节凋亡细胞情况,并计算视网膜神经节细胞的凋亡指数(apoptosis index,AI);免疫组织化学法观察小胶质细胞标记物CD68蛋白表达量及分布情况;硝酸还原酶法测量视网膜中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;免疫荧光法观察信号传导与转录激活因子3(signal sransducer and activator of transcription3,STAT3)的阳性表达,以及在视网膜上的表达分布情况;采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(real-time quantitative pcr detecting system,q PCR)观察三组大鼠视网膜STAT3、白介素6(interleukin,IL-6)的相对表达量。结果1血糖:在同一时间节点观察三组大鼠血糖,与N组大鼠相比,D组大鼠血糖升高明显;经黄芩苷治疗后,与D组大鼠相比B组大鼠血糖下降。三组比较差异具有统计学意义(F分组=948.217,P分组<0.05),三组大鼠的血糖值可排除时间因素(F时间=0.837,P时间>0.05)。2 HE染色:观察显示D组大鼠相对于N组大鼠,视网膜神经节细胞丢失,出现核固缩现象,视网膜总厚度降低。而经黄芩苷治疗后的,B组大鼠与D组大鼠神经节细胞数量增加,视网膜增厚。3 TUNEL及AI值:三组都出现凋亡细胞,D组大鼠较N组大鼠及B组大鼠凋亡细胞明显增多。进一步检测AI值结果表明,D组大鼠数值较N组大鼠明显升高(P<0.05),而经黄芩苷治疗后,与D组大鼠相比B组大鼠数值下降(P<0.05)。4 CD68蛋白表达量及分布情况:N组大鼠仅在内核层可见少量CD68蛋白;D组大鼠CD68蛋白分布于视网膜各层,且与N组大鼠对比表达明显增多;经黄芩苷处理后,B组大鼠CD68表达分布较D组大鼠局限,且表达少于D组大鼠。三组平均光密度值(average object desktop,AOD)表明,D组大鼠数值较N组大鼠明显升高(P<0.05),而经黄芩苷治疗后,与D组大鼠相比B组大鼠数值下降(P<0.05)。5视网膜NO含量测定:对三组视网膜NO含量进行比较,D组大鼠视网膜NO含量较N组大鼠显著升高(P<0.05),经黄芩苷治疗后,B组大鼠视网膜组织中NO的含量较D组大鼠显著降低(P<0.05)。6 STAT3免疫荧光:D组大鼠视网膜各层均有大量STAT3阳性表达,而N组大鼠视网膜STAT3表达主要分布在内丛状层,B组大鼠在各层的阳性表达均弱于D组。7 STAT3m RNA、IL-6m RNA的相对表达量:D组大鼠视网膜STAT3和IL-6的表达水平较N组大鼠显著升高(P<0.05),经黄芩苷治疗后,B组大鼠视网膜组织中STAT3和IL-6的表达水平较D组显著降低(P<0.05)。结论1黄芩苷对糖尿病大鼠神经节细胞具有一定保护作用。2黄芩苷对神经节细胞的保护作用与抑制小胶质细胞激活及IL-6/STAT3信号通路有关。图10幅;表13个;参147篇。 关键词: 黄芩苷;糖尿病视网膜病变;视网膜神经节细胞;小胶质细胞;IL-6/STAT3信号通路;
导师: 王林洪; 学科专业: 眼科学(专业学位) |