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张小敏,MCT2激活Nrf2通路调控H/R视网膜神经节细胞凋亡与焦亡张小敏,刘文,蔡傲竹.MCT2激活Nrf2通路调控H/R视网膜神经节细胞凋亡与焦亡[J].河北医学,2022,28(09):1425-1431. MCT2激活Nrf2通路调控H/R视网膜神经节细胞凋亡与焦亡张小敏刘文蔡傲竹武汉大学中南医院眼科摘要:目的:探究单羧酸转运蛋白2(monocarboxylate transporters 2,MCT2)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后视网膜神经节细胞凋亡与焦亡的影响及机制。方法:将视网膜神经节细胞RGC-5随机分为对照组、H/R组、MCT2组、MCT2+ML385组,通过脂质体将pcDNA3.1-MCT2重组质粒转染至RGC-5细胞,建立细胞H/R模型,并用Nrf2抑制剂ML385处理细胞;细胞进行对应处理后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹(Western blot)法检测转染效率,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Hoechst/PI染色法检测PI凋亡指数,Western blot法检测细胞内凋亡相关蛋白与焦亡相关蛋白的表达水平,免疫荧光染色观察细胞内核因子E2相关因子(Nrf2)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)表达。结果:将pcDNA3.1-MCT2转染至RGC-5细胞后,细胞内MCT2 mRNA与蛋白相对表达量均显著上调(P<0.05);经H/R处理后,细胞增殖活性下降,细胞凋亡率增加,PI凋亡指数升高,细胞内Bax和Caspase-3蛋白相对表达量均上调而Bcl-2蛋白相对表达量下调,GSDMD、Caspase-1、NLRP3及IL-1β蛋白相对表达量均上调,Nrf2荧光强度减弱,Caspase-1荧光强度增强,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞转染pcDNA3.1-MCT2再经H/R处理后,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率减少,PI凋亡指数降低,细胞内Bax和Caspase-3蛋白相对表达量均下调,Bcl-2蛋白相对表达量上调,同时,细胞内GSDMD、Caspase-1、NLRP3及IL-1β蛋白相对表达量均下调,Nrf2荧光强度增强,Caspase-1荧光强度则减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);而细胞经转染pcDNA3.1-MCT2与H/R处理后再用Nrf2抑制剂ML385作用,细胞增殖活性下降,细胞凋亡率与PI凋亡指数升高,细胞内Bax和Caspase-3蛋白相对表达量均上调、Bcl-2蛋白相对表达量下调,GSDMD、Caspase-1、NLRP3及IL-1β蛋白相对表达量均上调,Nrf2荧光强度减弱,Caspase-1荧光强度增强,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论:MCT2能够抑制H/R诱导的视网膜神经节细胞的凋亡与焦亡,该作用机制可能与激活Nrf2途径相关。 还原 关键词: 单羧酸转运蛋白2;视网膜神经节细胞;细胞凋亡;细胞焦亡;核因子E2相关因子; 基金资助: 湖北省卫生健康委科研项目,(编号:WJ2019Q040); |