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王小亚,微小RNA-199a-5p调控Klotho表达对体外脑缺血再灌注大鼠氧-葡萄糖剥夺/再灌注诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞损伤的保护作用王小亚,杜旭辉,何晓刚.微小RNA-199a-5p调控Klotho表达对体外脑缺血再灌注大鼠氧-葡萄糖剥夺/再灌注诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞损伤的保护作用[J].安徽医药,2022,26(11):2285-2291. 微小RNA-199a-5p调控Klotho表达对体外脑缺血再灌注大鼠氧-葡萄糖剥夺/再灌注诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞损伤的保护作用王小亚1杜旭辉2何晓刚11. 平顶山市第二人民医院神经内科2. 许昌市中心医院神经内科摘要：目的 探究抑制微小RNA-199a-5p（miR-199a-5p）表达对体外脑缺血再灌注（I/R）损伤大鼠模型氧-葡萄糖剥夺/再灌注（OGD/R）诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12）损伤的保护作用，并进一步探讨Klotho在该过程中的作用。方法 将PC12细胞分为Control组、OGD/R组、miR-NC inhibitor组、miR-199a-5p inhibitor组、miR-199a-5p inhibitor+shRNA-pLKO.1组和miR-199a-5p inhibitor+shRNA-Klotho组。RT-qPCR或蛋白质印迹法（Western blotting）确定各组PC12细胞转染效率；胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）和流式细胞术确定各组PC12细胞活力和凋亡率；试剂盒测量各组PC12细胞中活性氧（ROS）释放量、丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组PC12细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和白细胞介素-6（IL-6）水平；双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与Klotho靶向关系。结果 在OGD/R诱导的PC12细胞中，miR-199a-5p表达增高，Klotho表达降低；细胞活力降低，凋亡率增高；ROS释放量和MDA含量以及TNF-α、IL-1β、MCP-1和IL-6水平升高，SOD和GSH-Px活性降低（P＜0.05）。转染miR-199a-5p抑制物减弱了OGD/R的诱导PC12细胞活力下降和细胞凋亡率增高；削弱了暴露于OGD/R的PC12细胞中ROS释放量和MDA含量以及TNF-α、IL-1β、MCP-1和IL-6水平，并提高了SOD与GSH-Px活性（P＜0.05），而miR-199a-5p抑制物对OGD/R诱导PC12细胞的这些作用可被敲低的Klotho逆转（P＜0.05）。另外，miR-199a-5p负靶向调控Klotho表达（P＜0.05）。结论 抑制miR-199a-5p通过靶向Klotho减轻氧化应激和炎症反应来改善OGD/R诱导的PC12细胞损伤。 关键词： PC12细胞;再灌注损伤;嗜铬细胞瘤;微小RNA-199a-5p;氧-葡萄糖剥夺/再灌注损伤;氧化应激;炎症反应;Klotho; 基金资助： 河南省医学科技攻关项目（20170101210）； |
