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一手数据：间充质干细胞成骨诱导茜素红染色--显色过程

之前，我们展示了不同组织来源的间充质干细胞在成骨诱导过程中细胞形态的直观变化（骨髓、羊膜、脐带），得到了较好的反馈。


这里，我们针对成骨诱导完成时茜素红染色专门做了时间维度上的展示，希望能用最直观的方式让大家了解染色的程度和颜色问题。


01

成骨诱导基本信息
细胞：人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）
细胞培养基系统：人间充质干细胞培养基，货号：FY200012
细胞代次：P9
诱导培养基：人间充质干细胞成骨诱导试剂盒，货号：FY200006
诱导方法：同试剂盒说明书
诱导培养器皿：TC表面六孔细胞培养板（WHB-6）
诱导周期：24天
染色方法：茜素红染色
染色液添加量：1 ml/孔
总染色时长：30分钟
物镜拍照倍数：10X（高清图展示）

02

茜素红显色过程

视频展示：

高清图片展示：
茜素红染色（30 min）


P9-24D_0117_153011.jpg


茜素红染色（28 min）


P9-24D_0117_152812.jpg


茜素红染色（26 min）


P9-24D_0117_152616.jpg


茜素红染色（24 min）


P9-24D_0117_152417.jpg


茜素红染色（22 min）


P9-24D_0117_152219.jpg


茜素红染色（20 min）


P9-24D_0117_152033.jpg


茜素红染色（18 min）


P9-24D_0117_151817.jpg


茜素红染色（16 min）


P9-24D_0117_151617.jpg


茜素红染色（14 min）


P9-24D_0117_151428.jpg


茜素红染色（12 min）


P9-24D_0117_151217.jpg


茜素红染色（10 min）


P9-24D_0117_151014.jpg


茜素红染色（8 min）


P9-24D_0117_150806.jpg


茜素红染色（6 min）


P9-24D_0117_150633.jpg


茜素红染色（4 min）


P9-24D_0117_150414.jpg


茜素红染色（2 min）


P9-24D_0117_150230.jpg



肉眼观察：
悬空拍照：（孔底下方有光投射过孔板，透射光和反射光同时存在）


肉眼观察 (2).jpg

放到白纸上拍照：（上方光照，反射光成像为主）

肉眼观察.jpg



染色前
Day 24
4X


P9-24D_0117_144541.jpg

10X

P9-24D_0117_144605.jpg



03

注
间充质干细胞成骨诱导后，茜素红染色有时候并不理想。原因可能不只是试剂和染色技巧问题，对染色后程度的直观认知也非常关键。

该次染色展示，使用了人骨髓间充质干细胞诱导24天作为样本。白光视野下显示该次诱导应该是成功的，用这样的样本进行染色过程记录比较合适。

从结果看，这里我们提几个关键点：
其一，染色过程中随着时间的延长，钙结节红色程度逐渐明显（这个点比较容易看到和理解）。
其二，染色过程中随着时间的延长，最终不能被染色的部位颜色由棕黄色逐渐变淡，至30分钟时基本消失（一些朋友说的染色后颜色奇怪是不是和这个类似？）。
其三，染色过程中肉眼即可见到染色的孔从棕黄色逐渐变成红色。

建议：
1、染色时间不低于20分钟，可在镜下观察决定是否终止染色。
2、染色液尽量过量，6孔板不低于1ml。



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