初步判断是否为真菌污染，可从以下关键特征入手。在细胞培养过程中，若发生真菌污染，培养基颜色通常不会像细菌污染那样迅速且严重地变黄，细胞也不会立即死亡，多数情况下真菌与细胞能够同时存活一段时间。这一现象与细菌污染有着明显区别，细菌污染时，由于细菌大量繁殖产生毒素等原因，细胞往往会率先死亡，培养基也会快速变色、浑浊。从微生物个体大小来看，真菌一般比细菌大，例如酵母类真菌，其细胞直径可达数微米，而常见细菌的大小多在 1 微米以下。部分丝状真菌在培养体系中还会产生细长的丝状物，这些丝状物纵横交错，在显微镜下清晰可见。通过仔细观察培养基颜色变化、细胞存活状态以及微生物形态特征等表现，实验人员可对污染类型进行初步甄别。（简言之，三个方面：共存、大小、形状）。

（一）避免污染扩散

一旦发现疑似真菌污染，首要任务是避免污染扩散。切勿试图拯救被污染的细胞，也不要打开污染的瓶盖、培养皿盖子、培养瓶盖子等。在明确已经可以做到不扩散的前提下，可选择观察一天，若有增殖，果断清理出细胞室。不要首先试图搞清楚是什么具体污染，可以将被污染的细胞拿出培养室后再进行检测处理，以防止在检测过程中造成污染范围扩大。（注意，知道思想是把疑似当真实，先操练起来）

（二）彻底清除环境和用品污染

将可能被污染的环境、器材、培养基等彻底清理。包括培养箱、工作台、移液器、枪头、培养基、培养皿、PBS、胰酶等。对于能彻底消毒的物品，采用合适的消毒方法进行处理；对于无法消毒的物品，坚决扔掉并开启新的未被污染的用品，从源头切断污染链条。（已经在用的培养基和其他缓冲液果断不再使用）

（三）彻底消毒实验室（如有条件）

对实验室环境进行全面清洁与消毒。首先进行表面清洁，然后采用彻底的消毒方法，如甲醛熏蒸（目前实验室一般较少使用）、双氧水干雾消毒等。对使用的器械进行彻底消毒，包括高压灭菌、干热灭菌等方式，对于移液枪等器械，可用杀孢子剂清理其内部可能存在的污染。更换所有耗材，将使用过的耗材全部清理掉，营造一个洁净的实验环境，为后续实验重新开启创造条件。

使用能彻底杀灭的方式，不抱有侥幸心理，不抱有“理论上”心理，坚决彻底消毒。弗元生物推荐以下下几种实用的方法：

（一）物理方法

• 湿热灭菌：适用于耐高温、耐湿的器材，如移液枪头、镊子、玻璃器皿等，通过高温高压（121℃、30 分钟）可有效杀灭真菌及其孢子，是可靠的灭菌手段；
• 干热灭菌：用于耐高温的玻璃器皿、金属器械等，通过 160-180℃干热空气维持 2 小时以上，确保真菌孢子失活。

（二）化学方法

• 双氧水干雾消毒：通过专业设备产生双氧水干雾，可渗透到实验室角落，对空气和物体表面的真菌实现高效灭菌，无残留且符合环保要求；

• 杀孢子剂：针对移液枪内部、精密仪器缝隙等难以物理灭菌的部位，使用含过氧乙酸、过氧化氢等成分的杀孢子剂擦拭或浸泡，可有效杀灭真菌孢子；

• 甲醛熏蒸（特殊场景慎用）：有效性，甲醛气体对真菌具有极强的杀灭作用，可通过熏蒸（甲醛溶液 + 高锰酸钾反应释放气体）对整个实验室空间灭菌。局限性，甲醛具有强刺激性、毒性和致癌性，且易造成环境残留污染，不符合现代实验室环保要求，目前已极少使用。仅在其他方法无效且需紧急处理大面积污染时谨慎考虑，操作时必须严格防护并进行后续通风除醛。

需特别注意：紫外灭菌、酒精擦拭、臭氧灭菌等实验室常规消毒手段，对真菌尤其是孢子的杀灭效果显著不足，不可作为真菌污染后的主要处理方法。弗元生物特别提示，避免侥幸心理，避免“理论上可行”心理，避免“概率很低”心理。

• 紫外灭菌：紫外线对真菌菌丝体有一定抑制作用，但对真菌孢子杀灭效率低；
• 酒精擦拭：75% 酒精仅能杀灭真菌营养体细胞，对孢子无作用，且无法消除污染源头；
• 臭氧灭菌：臭氧气体的扩散性和灭菌持续性有限，臭氧的最佳灭菌条件在细胞培养室不易实现，对真菌污染无法有效清除。

真菌污染在动物细胞培养中危害较大，实验人员需充分认识常规消毒方法的局限性，优先采用高压灭菌、双氧水干雾等高效手段，并在污染发生时果断执行污染源处理和环境重置。