间充质干细胞复苏，实际上挺简单。要做好间充质干细胞的复苏，只需要做到三点，不污染、活下来、顺利贴壁。这里用最直接的语言介绍几个最关键的点，也许能解决你可能面对的困扰。
问题一：污染（头号公敌）
和常规不同，细胞复苏过程中最危险的污染源有水浴锅、冻存管、消毒液。
水浴锅：“重灾区”，主要是真菌污染。误区是加入灭菌水、硫酸铜等，以为可以防止污染，实际真菌污染一旦进入这些都无效。治疗方法，防止污染进入（灭菌水、冻存管进入前先做灭真菌处理），定期清理，煮沸灭菌。
冻存管：主要是真菌污染，细菌在冻存管放入超净工作区时已经用酒精等进行了杀灭。治疗方法，进入水浴锅前保持清洁，用能杀灭真菌和孢子的做表面处理。进入超净工作区之前，用酒精喷洗，即使不能杀灭，也尽量物理冲洗掉。
消毒液：主要是消毒酒精，主要污染是真菌污染。这个也还别不信，有些质量渣渣的产品确实会带有真菌，如果实在找不到污染源，考虑一下这个是不是合格。
主要问题，快速融化、充分稀释、干净弃液、操作轻柔、避免常温放置。
快速融化：从液氮中取出立即，多一秒都不等，放入37℃水浴（水浴锅或烧杯）或复苏设备，至冰块刚刚完全融化。
充分稀释：刚刚融化的细胞必须充分稀释，用完全培养基（10%FBS+基础培养基也可以）10倍冻存液体积。千万别为了节约培养基而偷工减料。
干净弃液：误区就是冻存液无毒。离心以后一定要尽量把液体吸弃干净，避免残留。
操作轻柔：离心弃液以后，手指轻轻拨动离心管底部，细胞便会分散开，然后再加入完全培养基，再次拨动混匀。误区就是用枪猛烈吹打，气泡一大堆。不要对均匀有执念，尤其是刚复苏的细胞，不均匀不要命。MSC自己会移动，轻柔并且减少折腾才最重要。
不要常温放置：冻存状态的细胞什么时候都不能常温放置。不管是运输的细胞刚接收，还是从液氮罐取出要复苏，还是从冻存盒移到液氮罐中。收到细胞把管子放到桌子上拍照更是要不得。
问题三：贴壁
对现阶段间充质干细胞的常规培养来说贴壁依然很重要，这里是几个最常见的影响贴壁的可能因素。
完全培养基：添加剂一定记得加，这个问题常常会出现，不是不知道，而是不小心。所以，重要的问题说三遍，完全培养基、完全培养基、完全培养基。
培养表面：培养瓶品牌一大堆，都是TC表面，但质量差别很大，最著名的那几个进口品牌也别去迷信，有时候就是培养表面有问题。不行刚复苏的时候就再多加点血清，或者包被一下。
细胞接种均匀度：不均匀没关系，只要培养基好，细胞就能长好，别相近办法使劲折腾就为了所谓的接种均匀。放轻松，接种均匀在复苏的时候没那么重要。
细胞贴壁时间：复苏后24小时别去碰它，复苏好了就去休息吧，细胞经过一个冰河世纪也需要休养生息的。
结语
当然，以上是写的是不全面的，但是最常见的可能。如果需要更多更详细的信息，可以参考其他专题文章，或联系我们进行技术交流。
