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弗元生物 >> 资 料 >>技术资料 >> 一手数据:hiPS连续培养的细胞形态及注意事项(P6-P14)
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一手数据:hiPS连续培养的细胞形态及注意事项(P6-P14)

之前,我们已经展示过ES和iPS传代以后每天的形态和增殖情况(hESCs人胚胎干细胞生长状态和增殖速度hiPS人诱导多能干细胞生长状态和增殖速度),这里我们将展示hiPSCs连续多代培养、每次细胞传代前的形态,并在文后介绍主要注意事项


01

人诱导多能干细胞培养基本信息
细胞:人诱导多能干细胞(hiPSCs)
细胞培养基系统:FyPluri(TM) hESCs/hiPSCs人多能干细胞全合成培养基,货号:RC200120
细胞代次:P6-P14(FyPluri连续培养
传代方式:Accutase消化
传代比例:1:20
培养器皿:TC表面六孔细胞培养板(WHB-6)
表面处理:基质胶包被
培养间隔时间:4天
物镜拍照倍数:4X、10X(高清图展示)
培养程序:
RC200120 流程图(竖版).jpg

02

增殖过程展示
P6(Day 4)
ips-gfp-dox_p6_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p6_4d_10X.jpg


P7(Day 4)
ips-gfp-dox_p7_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p7_4d_10X.jpg

P8(Day 4)
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ips-gfp-dox_p8_4d_10X.jpg

P9(Day 4)
ips-gfp-dox_p9_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p9_4d_10X.jpg

P10(Day 4)
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ips-gfp-dox_p10_4d_10X.jpg

P11(Day 4)
ips-gfp-dox_p11_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p11_4d_10X.jpg

P12(Day 4)
ips-gfp-dox_p12_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p12_4d_10X.jpg

P13(Day 4)
ips-gfp-dox_p13_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p13_4d_10X.jpg

P14(Day 4)
ips-gfp-dox_p14_4d_4X.jpg
ips-gfp-dox_p14_4d_10X.jpg


人多能干细胞细胞(ES、iPS)相关内容:
hESCs人胚胎干细胞生长状态和增殖速度(高清图片)
hiPS人诱导多能干细胞生长状态和增殖速度(高清图片)
FyPluri(TM) hES/iPS 人多能干细胞全合成培养基(RC200120)

03

注意事项
本文细胞传代方式为单细胞传代

换液:每24小时更换新鲜培养基,有利于保持细胞的良好状态。在实际操作中不更换新鲜培养基会导致细胞状态变差,尤其是细胞密度较高时。所以,不建议进行连续两天或三天不换液的挑战。

传代时间控制:传代时间依照标准为单个克隆的直径大小。单个克隆直径超过500μm后,细胞容易出现分化或干性下降或传代后较多细胞死亡。建议克隆直径不超过500μm进行传代,时间上一般控制在4天左右。

传代比例:一般传代比例为1:20。实际操作中可以观察传代比例和传代天数,正好4天能恢复到传代前的密度所用的传代比例最为合适,若需要以细胞数进行接种,则把这种传代状态下接种细胞量的具体数目(密度)定为接种数目(密度)标准。

传代细胞活性控制:接种的首日必须添加ROCK抑制剂(Y27632),否则单细胞传代会有大量细胞死亡。若忘记添加,能有细胞贴壁并存活,也可继续培养至恢复正常密度。若传代24小时后忘记去除Y27632,则细胞有可能发生分化,若细胞无法恢复,则只能放弃本次的细胞。

分化控制:保持细胞培养基的活性,避免使用超过有效期或完全培养基长时间放置。若细胞出现部分分化,在保证培养基活性正常后,正常传代一两次后细胞一般会恢复正常。

培养皿包被:培养皿必须进行特殊包被处理,包括基质胶(Matrigel)和层粘连蛋白(laminin521、laminin511等)。

以上图片归弗元生物原创所有。


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