刘宁,马洪芳,杨文浩.微小RNA-195对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭的影响[J].新疆医科大学学报,2021,44(07):794-800.
微小RNA-195对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭的影响
摘要：目的研究微小RNA（miR）-195通过Toll样受体4/核转录因子κB（TLR4/NF-κB）信号通路对结直肠癌细胞上皮-间质转化（EMT）及侵袭的影响,并探讨相关机制。方法取对数期结直肠癌HCT116细胞,随机分为Control组（不处理）、NC组（转染NC mimic）、miR-195 mimic组（转染miR-195 mimic）、miR-195 mimic+脂多糖（LPS）（TLR4/NF-κB信号通路激活剂）组（转染miR-195 mimic,并加入LPS 100μg/mL）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-195表达量;Transwell实验、划痕实验观察侵袭、迁移能力;Western blot法检测细胞波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达量;双荧光素酶实验验证miR-195与TLR4的靶向关系;Western blot法检测细胞TLR4、髓样细胞分化因子88（MyD88）、核转录因子κB p65（NF-κB p65）、p-NF-κB p65蛋白表达量。结果与Control组、NC组比较,miR-195 mimic组miR-195表达量、E-cadherin蛋白表达量显著升高,每个视野平均穿膜细胞数量显著减少,迁移率、Vimentin蛋白表达量显著降低（P<0.05）;与miR-195 mimic组比较,miR-195 mimic+LPS组miR-195表达量、E-cadherin蛋白表达量降低,每个视野平均穿膜细胞数量显著增加,迁移率显著升高,Vimentin蛋白表达量显著升高（P<0.05）;双荧光素酶结果显示,与仅转染pmir-RB-REPORTTM的293T细胞比较,共转染pmir-RB-REPORTTMTLR4-3’-UTR与miR-195 mimic的293T细胞荧光素酶活性值显著升高（P<0.05）;与Control组、NC组比较,miR-195 mimic组TLR4、MyD88蛋白表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低（P<0.05）;与miR-195 mimic组比较,miR-195 mimic+LPS组TLR4、MyD88蛋白表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高（P<0.05）。结论过表达miR-195可通过靶向抑制TLR4/NF-κB信号通路,发挥对结直肠癌细胞EMT及侵袭的抑制作用。
