经常会碰到什么干细胞老化的问题。想了很久,但又感觉怎么讲关于干细胞老化的问题都不太严谨,不太符合“科学”的原则。老化,这个在养干细胞的道友中几乎都知道的问题,我也时常讲起,听的人也大致知道是个啥。但,关于老化我确感觉找不到明确的可量化的标准,甚至连“老化”这个词本身就不那么科学。老化,似乎是干细胞培养中的一种普遍存在,却又好像不是科学意义上的“衰老”。好吧,不科学、不明确、不好定义,这些先不去管它,但总要有一点儿东西来描述它吧。
那就试着描述一下。以间充质干细胞为例,因为这个东西可能是我们讨论老化最多的,一个不小心,我们的间充质就沦落进了老化的深渊。说正事,所谓正常的或者健康年轻的间充质,体积较小、细胞轮廓光滑、核质比较大、细胞核紧凑明显、核仁清晰两三个、梭形纤维状或三角形、触角有但又不那么老长老长,形态上大概如此。性能上,整体倍增时间大概20-30小时(把传代后的短暂停滞计算在内)、具有成骨、成脂、成软骨分化能力。表面标志上,流式检测阳性指标都在95以上。
老化的间充质干细胞呢,形态上体积逐渐增大甚至到原来的三五倍甚至上十倍、形态坍缩成一大片烂树叶子样、细胞轮廓锯齿状的不清晰、细胞核也是硕大而不清晰、细胞整体折光性变弱、细胞内甚至一片混沌。性能上,细胞整体倍增时间大大延长、传代可能要五天甚至更久、有些培养表面怎么也看似没有细胞长上去、但分化能力还在(当然,如果没有了分化能力那就已经不是干细胞了)。表面标志上,阳性指标没有问题,但可能出现明显的离散系数增大。感觉上,老化主要是干细胞的自我更新能力变差,其实分化能力还在,如果分化能力丧失,那就不在我们讨论老化的范围内啦。
这些都是常见的问题,我们基本都能看到,就是描述的时候可能每个人不同而已。有个重要的问题可能往往被忽略,那就是间充质干细胞贴壁。其实,干性越好、增殖越快的干细胞它的贴壁能力就越差,反之越是老化的细胞它贴壁就越牢固。贴壁性能差常表现在两个明显的方面,一是细胞长着长着就聚团啦,刚接种上贴壁分散都还好,长个一两天细胞就神奇地聚成了很多小球。二是细胞消化特别容易,室温(20度左右)一分钟最多不超过两分钟就都掉下来啦。老化的细胞这两个方面是相反的。
不只是间充质干细胞,多能干细胞(ES、iPS)似乎也是符合上边讲的。只是多能干细胞我们用状态好和状态不好的表述方式。状态好的,甚至全能性的(naive)核质比巨大、细胞很小、折光性很好、立体感很强、细胞边缘很光滑、贴壁甚至是很半贴壁状态、甚至要种在饲养层上。状态不好的细胞呢,我们不讲分化,单说“老化”,那就是细胞变肥大、折光性变弱、立体感下降甚至趴在培养板表面(如E8培养),整体轮廓不圆润,当然,贴壁也变的比较好啦。
于是,感觉好像发现了一些问题,越好的干细胞贴壁越差、越差的干细胞贴壁越好,越好的干细胞越小、越差的干细胞越大。我们不讲科学,只是养细胞多了以后的感觉、直觉。杨振宁老师讲,直觉是建立在科学认知上的潜意识发现,希望我们的直觉也是。但愿有一天我们的直觉能变成科学的结论。
嘚吧嘚这么多,说点养间充质干细胞的时候实在的东西。怎么操作?
1、接受我们养的细胞贴壁不那么好,甚至偶尔长成小球我们应该偷着乐,表示我们的细胞状态还不错。
2、 如果贴壁很好,甚至不幸出现了我们上边讲的各种让人难过的现象,那一定是培养系统出了问题,更换培养基吧,再生医学培养基成品的我们都拿来试一试。好吧,如果觉得太麻烦太费钱,不妨试试BI和弗元生物的。
3、如果细胞保持了年轻,却出现了一直长成小球,也挺恼火,咋办?我们和很多朋友已经踩过坑啦,那就是培养表面的问题。不要讲用的是进口的好板子,没用的,朋友们试过了,那几大进口品牌的培养板都无助于贴壁,换掉吧,去试试国产的,也许你能找到。我们找到了几个好点的,比方说青岛金典、上海卧宏。
4、 实在还是解决不了贴壁问题,试着拿各种东西包被一下吧。也要注意包被的东西不能有副作用的,筛选包被的东西确实也是个耗时耗力的事情,但没办法,学费总还是要交的。
说了一大堆,解决问题就两个方面,培养基和培养表面。其他的我们就不要在怀疑自己怀疑人生啦。解决了这两个问题,其实我们都是高手,因为其他的问题我们从各种小红书小宝书上都学到见到过。祝我们早日成为高手!
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