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孙锦秋. 炎症环境中PD-L1在人脂肪间充质干细胞上的作用孙锦秋. 炎症环境中PD-L1在人脂肪间充质干细胞上的作用[D].河北大学,2021. 炎症环境中PD-L1在人脂肪间充质干细胞上的作用孙锦秋河北大学摘要：炎症性疾病因具有发病机制复杂、预后差异性大和涉及范围广等特点,已成为一类影响全球人群健康的重大疾病。近年来多项研究证实间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）具有治疗和减缓炎症的作用,但其机制尚不清楚,同时炎症环境与MSCs相互作用的复杂性,对MSCs归巢率和免疫稳定性的影响也有待进一步研究。程序性死亡配体-1（Programmed death ligand-1,PD-L1）是一种Ⅰ型跨膜蛋白,表达于多种细胞表面,通过与程序性死亡受体-1（Programmed death-1,PD-1）结合,维持外周和中枢免疫细胞耐受,静息状态下PD-L1参与塑造MSCs的免疫调节功能。因此,本课题以PD-L1为靶点,研究了炎症环境对MSCs迁移和免疫功能的影响,及PD-L1在MSCs上的表达调控机制。本课题采用人脂肪间充质干细胞（Human adipose-derived stem cells,hADSCs）为研究对象,通过用10 mg/L的脂多糖（LPS）刺激细胞来构建体外炎症模型,研究内容包括以下四个方面:（1）采用qRT-PCR、Western blot和IF法检测hADSCs中PD-L1的表达情况。（2）探究炎症环境中PD-L1表达水平对hADSCs迁移能力的影响。采用细胞划痕和Transwell实验检测hADSCs的迁移能力,qRT-PCR检测趋化因子的表达。（3）探究炎症环境中PD-L1表达水平在hADSCs对B细胞免疫调节中的作用。采用CCK-8法检测B细胞增殖能力,ELISA法检测B细胞分泌IgG能力。（4）探究PD-L1在hADSCs中的表达调控机制,采用qRT-PCR法检测hADSCs中可能调控PD-L1表达的基因在m RNA水平的变化。结果显示,（1）10 mg/L LPS刺激细胞后,hADSCs中PD-L1的基因转录水平和蛋白表达显著升高。（2）10 mg/L LPS刺激细胞后,hADSCs的迁移显著增强,细胞趋化相关因子的m RNA相对表达量都显著升高。但在转染了siRNA-PD-L1后,hADSCs的迁移被抑制,CXCR4的m RNA相对表达量显著降低。（3）共培养组中,hADSCs抑制了B细胞的增殖和分泌IgG的能力;转染了siRNA-PD-L1后,hADSCs对B细胞的抑制效应被部分逆转。（4）10 mg/L LPS刺激细胞后,hADSCs中PD-L1和NF-κB的基因转录水平都显著升高;加入NF-κB的抑制剂后,hADSCs中PD-L1和NF-κB的表达显著降低。综上所述,本实验利用hADSCs体外炎症环境模型探究了PD-L1在MSCs治疗和减缓炎症中的作用,发现炎症环境中PD-L1高表达促进hADSCs的迁移和对B细胞的免疫抑制作用,同时转录因子NF-κB参与了hADSCs上PD-L1的表达调控。表明可通过添加炎性因子预处理或基因修饰过表达PD-L1来提高MSCs的归巢率和免疫抑制功能,为进一步应用MSCs治疗炎症性疾病奠定了研究基础。 关键词： 程序性死亡配体-1;间充质干细胞;炎症;细胞迁移;免疫抑制; |
