| 文献摘要： | 背景皮动蛋白是一种分子标志物,在细胞骨架形成中,它作为一种肌动蛋白结合蛋白,对细胞运动及运输起作用。其在包括头颈部、乳腺、胃、肝脏等肿瘤组织中呈现高表达,与肿瘤进展及预后等方面均存在相关性。既往cortactin与结直肠癌相关研究较少,其表达对肿瘤细胞增殖的影响尚不清楚。目的通过免疫组化及组织芯片研究,明确皮动蛋白在结直肠癌组织及正常组织中的表达差异,分析其差异表达与肿瘤病理参数及预后的相关性。在体外对细胞中皮动蛋白表达进行调控,通过评估增殖能力及细胞周期与凋亡变化,探索其表达对于结直肠癌细胞增殖的影响。方法(1)应用免疫组化相关技术对319例结直肠癌患者手术标本中cortactin的表达进行检测,对比其在肿瘤组织和正常组织中的表达差异;(2)对比患者病理结果与该蛋白表达的关系,收集患者随诊及预后信息,并对比术后辅助治疗情况,分析cortactin对结直肠癌患者的临床指导作用;(3)采用Western blot法及qRT-PCR检测siRNA及质粒在体外细胞系中的转染效率,证实相关方法可以调节细胞系中cortactin蛋白的表达;(4)敲降两个肿瘤细胞系HT29和SW1116中cortactin的蛋白表达,EdU法检测细胞的增殖活性;(5)提高肿瘤细胞系SW1116和正常细胞系FHC中cortactin的表达,CCK8法检测细胞增殖活性;(6)对HT29、SW1116和FHC细胞系中的cortactin表达进行调控,对于细胞成球增殖能力和细胞群体依赖性,使用软琼脂克隆形成实验进行检测;使用流式细胞检测调控cortactin表达对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果(1)319例患者中cortactin在肿瘤组织中的表达比例显著高于在正常组织中的表达比例(p<0.001);(2)319例患者中cortactin表达与肿瘤T分期(p=0.004)、N分期(p<0.001)、AJCC分期(p<0.001)、分化程度(p=0.015)、神经侵犯(p=0.004)和术前CEA(p=0.013)显著相关;(3)Cortactin表达与较差的无病生存期(DFS)(p=0.036)和总生存期(OS)(p=0.043)相关,分层分析显示这种倾向在Ⅱ-Ⅲ期患者中更明显;(4)在多因素分析中,cortactin表达是一个独立的预后风险因素,与较差的无病生存期(风险比3.686(95%CI 2.167-6.268),p<0.001)和总生存期(风险比 2.018(95%CI 1.133-2.884),,p=0.012)相关;(5)回顾性研究Ⅱ-Ⅲ期cortactin 阳性患者行术后放化疗后DFS(p=0.007)及OS(p=0.015)均延长;而对于cortactin阳性的Ⅱ期患者,术后放化疗并没有改善患者的DFS或OS;(6)降低cortactin表达可以减弱HT29、SW1116的细胞增殖能力;(7)提高SW1116和FHC中cortactin表达,可以增强肿瘤和正常细胞的增殖能力;(8)降低肿瘤细胞HT29、SW1116中cortactin表达可以促进细胞凋亡,降低细胞处于合成期的比例,减弱细胞的增殖成球能力;提高正常细胞FHC中cortactin表达,可以促进细胞凋亡,提高细胞处于合成期的比例,增强细胞的增殖成球能力。结论(1)结直肠癌患者癌组织中的cortactin阳性表达比例明显高于配对的正常组织;(2)结直肠癌组织中的cortactin的表达与肿瘤的T分期、N分期、AJCC分期、分化程度、神经侵犯和术前CEA均呈现相关性;(3)Cortactin表达是一个独立的预后风险因素,预示较差的DFS和OS,这种倾向在Ⅱ-Ⅲ期患者中更加明显;(4)对于术后辅助治疗有争议的中晚期患者,或是为了区分相同分期下的高危患者和管理病理分期与临床表现有差距的患者,cortactin表达可以作为一条参考标准;(5)肿瘤细胞中cortactin表达下降可以降低细胞增殖能力,促进细胞凋亡;正常细胞中cortactin表达上升可以增强细胞增殖能力,促进细胞凋亡。 |
