1. 诱导培养基:诱导培养基请按照使用说明书使用。完全培养基配制可以提前几个小时或几天进行,务必使各组分充分混匀和溶解。2. 诱导过程中的细节变化:成脂诱导时的细胞密度尽量达到90%以上,这是因为添加诱导液以后会使细胞停止生长且杀死少量细胞,如果你想得到一些好的染色照片时,这一步至关重要。细胞诱导培养1天时,除了可能有少量死细胞以外无其它明显的形态变化,2-3天时在高倍镜下可以观察到有些细胞内部出现多个极小的亮亮的脂滴,4-6天时更多的细胞出现脂滴,之前的小脂滴也变得更大。之后,随着脂滴的变大,部分脂滴会逐渐脱落。为了不影响后续实验,这要求实验者根据自己的要求找寻最好的终止时间,一般我们会在诱导8-10天时固定。如果一直不固定,脂滴会发生脱落或者脂滴堆层现象,这都会影响后续拍照的美观。当然,这是大多数的间充质干细胞成脂诱导过程中的细胞变化,比如脂肪或骨髓来源的间充质干细胞,而有些其它来源或者状态不好的间充质干细胞,它们的诱导过程会比变长,有些甚至需要一个月,而且成脂率可能也会降低。具反馈,有些研究人员获得的脐带间充质干细胞成脂效果不理想,甚至很难出现较大的脂滴,这可能与细胞获取、培养方法和细胞状态有关。
1. 染色问题:染色严格按照说明书进行。在固定之前操作要轻柔,避免细胞成片脱落导致实验无法继续。固定后相对不易脱壁,但也尽量避免较大的液流冲击。染色液中的杂质对拍照影响较大,染色开始前尽量用滤纸过滤或者离心去除杂质。染色后拍照颜色可能会有色差,可以用PS对颜色进行调整。2. 培养基本条件:细胞培养必须佩戴口罩、帽子、手套。头发、口鼻等是常见的细胞支原体污染源,培养室内头发等不能暴露在外。3. 培养板使用问题:如同时进行不同来源细胞的成脂诱导或者其他诱导实验,由于这些细胞诱导终止的时间可能存在差异,建议使用多个的细胞板进行实验,尽量不要安排在一块细胞板上,具体操作请根据具体情况实施。