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弗元生物-再生医学培养基 >> 资 料 >>技术资料 >> 间充质干细胞成软骨诱导注意事项
详细内容

间充质干细胞成软骨诱导注意事项

01

细胞准备
具体内容参考:间充质干细胞成骨诱导注意事项,这里不再重复描述。


02

诱导过程
1. 诱导培养基:诱导培养基请按照使用说明书使用。完全培养基配制务必使各组分充分混匀和溶解。
2. 操作细节:关于细胞数量,一般一个T25培养瓶做一个诱导,细胞太少会导致成球过小不容易观察,细胞过多会导致成球后内部供养不足而散裂。成球诱导前有两次的预混液洗涤过程,这个过程不能省略,不能用其他培养基替代。关于离心力,最后进入诱导时的离心力量不易过大,一般实验室水平离心机800-1000 rpm即可。诱导器皿最好使用离心管,培养基加的量需要按照说明书的量,减少可能导致细胞状态变差甚至死亡。可以使用具有透气孔的离心管盖子,类似培养瓶的透气盖,但不要使用TC或其他易贴壁的离心管。不建议使用培养板进行培养,因为诱导周期长,换液和挥发会导致培养液渗透压增加而导致细胞状态差或死亡,甚至细胞团碰裂。
3. 诱导过程中的细节变化:成软骨诱导时置于培养箱24小时后细胞会呈现明显的聚团成球状,此时会有部分黏连到离心管壁,轻轻拨弹离心管底细胞团会脱离离心管壁。偶尔有情况下很难脱离,若已经明显呈球状,则不影响诱导。即使细胞成球,也不是完全悬浮,在重力作用下依然是沉到管底,这属于正常现象。细胞成球后的大小约为直径1mm左右,诱导过程可能会逐渐缩小,若不是完全死亡,可以继续进行诱导。若待鉴定的细胞状态不佳,或纯度不高,在诱导过程中细胞团变小或部分细胞脱落的可能性增大,这种情况下需要从源头上解决细胞状态和纯度的问题后再进行鉴定诱导。

软骨球染色.jpg

软骨球切片染色.jpg



03

其他

1. 染色问题:染色严格按照说明书进行。染色方式有两种选择,一种是进行切片染色,固定后的石蜡切片染色还可以大致看到内部结构。一种是对软骨球直接染色,简单方便,可以使用体式镜或相机直接拍照。当然,发文章是可以两种都呈现在结果中。
2. 培养基本条件:细胞培养必须佩戴口罩、帽子、手套。头发、口鼻等是常见的细胞支原体污染源,培养室内头发等不能暴露在外。
有相关技术问题,请联系弗元生物。

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