产品编号：

RC200106-100ML

存储条件：

2-8 ℃避光保存，有效期6个月；

-20 ℃避光保存，有效期12个月；

避免反复冻融。

产品简介：

本产品专为人间充质干细胞冷冻保存设计，是即用型细胞冻存液。成分明确，不含动物源成分，主要成分为可注射的药物及辅料，在间充质干细胞治疗用研究中具有显著优势。

适用于人间充质干细胞hMSCs，包括人骨髓间充质干细胞hBMSCs、人脂肪间充质干细胞hAMSC、人羊膜间充质干细胞hAD-MSCs、人脐带间充质干细胞hUMSCs等。同样适用于其他哺乳动物细胞冷冻保存，包括293、Hela、NIH3T3等，具体使用时请自行分析判断对细胞类型的影响。

本产品含有DMSO。

适用实验与操作过程：

1.         细胞冻存

A.         按正常细胞培养方法收集细胞。确保待冻存的细胞状态良好。

B.         推荐冷冻保存细胞密度为5×10⁵-2×10⁶细胞/ml。

C.         根据细胞量和冻存管规格计算、选择冷冻保存液的体积。

D.         将收集细胞沉淀，轻轻振荡分散细胞，加入适当体积冷冻保存液，重新均匀悬浮细胞。

E.         使用程序降温仪或程序降温盒冷冻细胞。

F.         冷冻的细胞转移至液氮中长期保存。

2.         细胞复苏

A.         将细胞从液氮中取出，37℃水浴快速解冻。

注：也可选择细胞复苏仪器或金属浴解冻。

B.         解冻的细胞悬液加入5-10倍体积的室温预热完全细胞培养基，混合均匀，100-200 g离心收集细胞。

注：培养基必须预热，或室温复温至少30分钟。

C.         复苏的细胞可用于正常细胞培养或实验操作。

注意事项与常见问题：

1.      适用的细胞类型？

本产品为hMSCs冻存设计，经过验证能很好保障hMSCs复苏后的活性。经过分析也适用于多种哺乳动物细胞的冻存保护。具体到实验室的细胞需要自行试用、分析。分析内容如细胞活性、细胞表型等。

2.      细胞收集离心力的选择？

本产品细胞收集过程中的离心力应保持与正常培养过程中的离心力相同。若因特殊情况导致的细胞无法沉降，请适当增加离心力，但不宜超过200×g。注意离心时离心管内液体尽量不要超过总容积的2/3。

3.      冻存模式一定要用程序降温吗？

产品研发时进行过直接将细胞放置-80℃冰箱进行存储，某些细胞类型复苏后细胞活性稍有降低，所以该说明书给出的参考方式为程序降温。若需要直接置于-80℃冻存，请根据所用细胞自行确定。

4.      复苏后是否需要快速去除冻存液？

对常温下细胞放置的毒性进行分析，发现常温放置1-2小时对细胞活性和继续培养的状态无明显影响。所以原则上不必立即去除冻存液。然而，hMSCs培养过程中应尽可能避免过多因素，所以建议复苏后尽快去除冻存液成分。此外，其他细胞类型对冻存液的敏感程度不同，所以请自行判断，或直接尽快去除。