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产品编号 FYG-rs7574865
MGB荧光探针法SNP分型试剂盒(rs7574865)
产品编号: FYG-rs7574865-1000T FYG-rs7574865-2000T 存储条件: 2-8 ℃ 保存,有效期1周; -20 ℃保存,有效期6个月; 避免反复冻融。 产品组分:
产品简介: 本产品是基于Taqman MGB探针法开发的SNP分型试剂盒。该试剂盒具有灵敏度高、区分度高、可重复性高、抗干扰性强等特点。试剂盒包含RealFAST Probe PCR mix 、Lo-ROX、Primer & Probe premix 、ddH2O等SNP分型所需的所有试剂,无需另外准备配套试剂,具有操作简便、分析简单、结果可靠等优点。 自备耗材和设备: 移液器2 μl,10 μl,100 - 200 μl; 冰盒; 荧光定量PCR管; 实时荧光定量PCR仪。 反应设置与操作过程: 1. 探针分型: FAM标记G型;VIC标记T型。
2. 反应体系:
注:*处进行荧光信号采集。 3. 操作过程: 3.1 试剂准备:试剂盒从-20℃冰箱取出,室温融化;涡旋仪混匀,瞬时离心待用。 3.2 用量计算:根据需要检测的样本数n,配置n+4个反应体系混合液。即5×(n+1)μl RealFAST Probe PCR mix、(n+1)μl Primer&Probe premix (rs7574865)、0.2×(n+1)μl Lo-ROX(50×)、2.8×(n+1)μl ddH2O。(若反应数较大,可适当多增加几个反应。) 3.3 反应混合液配制:将上述计算的用量按次序用移液器加入同一新鲜干净的EP管中,涡旋仪混匀,瞬时离心。(若反应数较大,可选用较大EP管。请务必旋窝充分混匀!) 3.4 添加反应混合液:按照每孔9μl的量将配置好的反应体系分装至八联排(或96孔板)。 3.5 添加模版:将1μl已经定量并稀释至10-40 ng/μl 的DNA模板加入分装的反应体系中。 3.6 添加质控:三种质控质粒中各取1 μl分别加入到反应体系中,构成三个阳性质控(可选);加入1 μl ddH2O与另一反应体系中,构成阴性质控。 3.7 瞬时离心:八联排(或96孔板)盖上管盖(或封膜),瞬时离心,使DNA模板与反应体系混合并处于管底。(请务必进行瞬时离心,否则可能出现无扩增的结果!) 3.8 上机:将八联排(或96孔板)放入ABI7500PCR仪,根据反应条件设置ABI 7500软件,开机运行。(请根据选用的机型进行相关设置。) 3.9 特别说明:配置体系过程中,需要戴一次性乳胶手套(或PE手套);避免接触管盖(或封膜),防止污染,导致荧光信号不准确。阳性质控质粒拷贝数极高,应严格规范操作,防止交叉污染。 注:操作请在冰盒上进行。
1. 存储条件与反复冻融如何选择? 该产品-20 ℃条件下可以存储6个月;2-8 ℃可以存储1周。组分A、B、C均不能反复冻融,融化后不建议再次冻存。 2. 反应体系的确认? 该试剂盒建议反应体系10 μl。若必须使用其他反应体系,需自行验证后在进行大量样本的检测。 3. 反应条件是否可以改动? 本试剂盒的反应条件根据多种参数确定,并适用于10 μl反应体系,为确保实验数据的准确性,不建议改动。 4. 机器设备的适用与选择? 该试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪,但注意Lo-ROX的添加有所不同,需严格按照试剂盒和机器说明书进行。 5. 出现无扩增? 该实验为精细实验,对操作要求较高。请按照说明书操作,尤其是加样、加样后的离心等。为提高实验成功率,可选择加倍反应体系,例如使用20 μl体系进行初步学习,实验条件可不变。 6. 如何避免未扩增的样本出现假分型结果? 不同引物的扩增背景荧光强度不同,分析结果需要判断是背景还是扩增产物荧光。因样本质量或加样失败均会导致扩增失败,此时背景荧光容易被误判为扩增信号,导致判读基因型错误。为避免此情况发生,在数据判读前,应先辨别所有样本及阴阳性对照(若有)扩增曲线是否正常;若出现无扩增或扩增曲线异常的样本,应先剔除,然后分析其他样本的基因分型结果,此样本查明情况后重新检测。 7. 扩增曲线荧光信号弱,或扩增曲线呈锯齿状? 此问题可能有多种原因造成,常见原因及解决办法见下表。
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