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CCK-8试剂盒

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产品编号 FY600001
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货号产品名称规格目录价(元)促销价(元)
FY600001-1MLCCK-8试剂盒1ML15090
FY600001-5MLCCK-8试剂盒5ML600360
FY600001-10MLCCK-8试剂盒10ML960576
FY600001-100MLCCK-8试剂盒100ML86645198


  • 一、产品简介

     
        CCK-8试剂盒基本成分是水溶性的WST-8,广泛应用于细胞增殖与毒性的快速检测,对细胞无毒害。WST-8是类似于MTT的化合物,与MTT不同的是WST-8具有很好的水溶性,因此检测过程不需要破坏细胞,细胞可以继续应用于其他实验。

        WST-8可以被细胞内的脱氢酶氧化成水溶性的橙黄色的甲臜染料,生成的甲臜量与细胞的数量和活力成正比。因此可以用甲臜在450 nm处的光吸收表征细胞的活力。

    二、产品特色

    1. 经典灵敏度范围,保障数据的稳定和可靠性,建议细胞数6000-10000个;
    2. 产品稳定性好,4℃避光可以保存1年,-20℃或以下可以保存更久;
    3. 操作简便,只需要将CCK-8加入待测孔内,反应到合适时间即可检测;
    4. 多种包装规格,可根据实验需要灵活选择;
    5. 低细胞毒性,检测完成后细胞可回收用于其他检测。

    三、适用实验与操作

    1、细胞计数
    • 制备细胞悬液,计数。
    • 按比例(如1:2)用培养基稀释细胞悬液。一般需要做3-5个细胞浓度梯度,每梯度至少做3孔重复,每孔100 μl培养基。
    • 接种细胞4 h之后(贴壁细胞待细胞贴壁,悬浮细胞待细胞适应),加入10 μl CCK-8试剂/孔。培养1-4 h后检测OD450。
    • 以OD450值作纵坐标,接种细胞数作横坐标绘制标准曲线。
    • 待测细胞接种处理方式同标准曲线,检测的OD250值带入标准曲线公式,计算得到细胞数。
    2、细胞活性检测
    • 在96孔板中接种细胞悬液,每孔100 μl,至少做3孔重复。将细胞培养板37 ℃,5% CO2预培养一段时间。
    • 每孔加入10 μl CCK-8试剂。
    • 培养板在培养箱中培养1-4 h。
    • 酶标仪检测OD450吸光值。
    • 若不能立即测定,可每孔加入10 μl 0.1M HCl或者1%SDS,室温避光保存。在24 h内测定。
    • 根据OD值判断细胞活性,OD值与细胞活性成正比。
    3、细胞增殖与毒性检测
    • 在96孔板中接种细胞悬液,每孔100 μl,至少做3孔重复。将细胞培养板,按照实验设计预培养一段时间(例如多数情况为24 h)。
    • 在培养板中每孔加入一定量待测药物(化学药、生物药、生物材料等,按照对数或线性浓度梯度进行设置分组)。
    • 在培养箱中培养适当的时间(例如6 h,12 h,24 h,48 h等,具体时间根据实验内容确定)。
    • 药物培养结束,每孔加入10 μl CCK-8试剂。
    • 培养板在培养箱中培养1-4 h。
    • 酶标仪检测OD450。
    • 若不能立即测定,可每孔加入10 μl 0.1M HCl或者1%SDS,室温避光保存。在24 h内测定。
    • 根据OD值判断药物对细胞增殖或毒性的影响,OD值与细胞活性和数量成正比,与药物毒性成反比。

    四、包装规格与价格
     
    货号产品名称规格目录价(元)促销价(元)
    FY600001-1MLCCK-8试剂盒1ML15060
    FY600001-5MLCCK-8试剂盒5ML600240
    FY600001-10MLCCK-8试剂盒10ML960576
    FY600001-100MLCCK-8试剂盒100ML866  45198


    五、产品性能
     


            


    六、应用实例



    Biomed Environ Sci, 2019; 32(4): 272-280


    七、被引用文献

    NANOG Alleviates the Damage of Human Hair Follicle Mesenchymal Stem Cells Caused by H2O2 through Activation of AKT Pathway
    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31217063

    李旺. 血清外泌体microRNAs在卵巢癌诊断中的应用价值及miR-1246对卵巢癌细胞生物学行为影响的体外研究[D].河北医科大学,2019.

  • 杨悦. 结直肠癌患者血清外泌体中miR-17-5p的表达及其功能的初步研究[D].河北医科大学,2019.

    许金煌,范莹.胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊Cajal样间质细胞的影响[J].中国临床研究,2019,32(11):1457-1461.




  • 八、相关产品
    名称货号
    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITCFY600017
    Annexin V-FITC/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒FY600003
    Annexin V-GFP/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒FY600016
    PI细胞周期与凋亡试剂盒FY600002


引用文献

Author

Pubmed ID

Journal

Shi JH

31217063

Biomed Environ Sci




CCK-8试剂盒产品说明书

 


 

产品编号:

FY600001-1ML

FY600001-5ML

FY600001-10ML

FY600001-100ML

存储条件:

2-8 保存,有效期12个月;

-20 ℃保存,有效期24个月或更久;

避免反复冻融。

产品简介:

CCK-8试剂盒基本成分是水溶性的WST-8,广泛应用于细胞增殖与毒性的快速检测,对细胞无毒害。WST-8是类似于MTT的化合物,与MTT不同的是WST-8具有很好的水溶性,因此检测过程不需要破坏细胞,细胞可以继续应用于其他实验。

WST-8可以被细胞内的脱氢酶氧化成水溶性的橙黄色的甲臜染料,生成的甲臜量与细胞的数量和活力成正比。因此可以用甲臜在450 nm处的光吸收表征细胞的活力。

 自备耗材和设备:

10 μl 移液器或者多通道移液器

100-200 μl 移液器或者多通道移液器

450 nm滤光片的酶标仪

平底96孔细胞培养板

CO2培养箱

适用实验与操作过程:

1. 细胞计数

制备细胞悬液,计数。

按比例(如1:2)用培养基稀释细胞悬液。一般需要做3-5个细胞浓度梯度,每梯度至少做3孔重复,每孔100 μl培养基。

接种细胞4 h之后(贴壁细胞待细胞贴壁,悬浮细胞待细胞适应),加入10 μl CCK-8试剂/孔。培养1-4 h后检测OD450

OD450值作纵坐标,接种细胞数作横坐标绘制标准曲线。

待测细胞接种处理方式同标准曲线,检测的OD250值带入标准曲线公式,计算得到细胞数。

2. 细胞活性检测

96孔板中接种细胞悬液,每孔100 μl,至少做3孔重复。将细胞培养板37 ℃,5% CO2预培养一段时间。

每孔加入10 μl CCK-8试剂。

培养板在培养箱中培养1-4 h

酶标仪检测OD450吸光值。

若不能立即测定,可每孔加入10 μl 0.1M HCl或者1%SDS,室温避光保存。在24 h内测定。

根据OD值判断细胞活性,OD值与细胞活性成正比。

3. 细胞增殖与毒性检测

96孔板中接种细胞悬液,每孔100 μl,至少做3孔重复。将细胞培养板,按照实验设计预培养一段时间(例如多数情况为24 h)。

在培养板中每孔加入一定量待测药物(化学药、生物药、生物材料等,按照对数或线性浓度梯度进行设置分组)。

在培养箱中培养适当的时间(例如6 h12 h24 h48 h等,具体时间根据实验内容确定)。

药物培养结束,每孔加入10 μl CCK-8试剂。

培养板在培养箱中培养1-4 h

酶标仪检测OD450

若不能立即测定,可每孔加入10 μl 0.1M HCl或者1%SDS,室温避光保存。在24 h内测定。

根据OD值判断药物对细胞增殖或毒性的影响,OD值与细胞活性和数量成正比,与药物毒性成反比。

如果药物本身具有氧化性或者还原性,或者药物在OD450处有光吸收,加入CCK-8前要更换新鲜培养基以去除药物,避免药物对CCK-8试剂有影响,或者增加背景。



常见问题:

 1. 每孔应当接种多少细胞?

96孔板,每孔细胞接种量一般不低于1000个(100 μl培养基),推荐6000-10000个细胞。生长缓慢的细胞,如白细胞、神经细胞等,接种量不低于3000个,最高可接种于100000个。推荐进行预实验确定最佳细胞接种量。若用24孔板或者12孔板等细胞培养板做实验,CCK-8的使用量等比例放大,即CCK-8加入量为培养基体积的1/10

2. 如何确定CCK-8孵育的时间?

通常加入CCK-81-4 h之间测OD450OD值在0.3-1.2之间为佳。细胞接种量大,细胞生长快,可以减少孵育时间,反之增加孵育时间。可以每隔半个小时测一次OD450,确定最佳孵育时间。

3. OD值太低怎么办?

增加细胞接种量或者增加CCK-8孵育时间。

4. 如何设定空白对照?

不接种细胞的100 μl 培养基,加入10 μl CCK-8,测得OD450的值即为空白对照。加药物的实验中,如果药物在OD450有光吸收,则空白对照为100 μl 培养基,加10 μl 药物,10 μl CCK-8,测得的OD450的值为空白对照。

5. 如何设定参比波长?

一般情况下不需要设定参比波长,当样品浑浊时,设600-650 nm的参比波长,消除浑浊因素造成光吸收。

6. 哪些物质对OD值测定有影响?

如果培养基中的物质(如酚红)在OD450处也有光吸收,会影响OD测定,此时可以用空白对照去除测定的影响。

如果待测药物在OD450处有光吸收,此时的空白对照中应当包含待测药物。

如果待测药物具有氧化性或者还原性,那么药物对OD450测定也有影响。一般来说,还原性的物质会增加OD值,氧化性的物质会降低OD值。可以在加CCK-8之前换新鲜的培养基,去除药物的影响。

7. CCK-8对细胞有毒害作用吗?

CCK-8对细胞的毒性非常低,检测结束,细胞还可以继续用于其他实验。

8. CCK-8的保质期为多久?

4℃避光保存,至少可以12个月,-20 ℃保存至少2年。保存时间稍长会使实验中背景值变高,但不影响使用。

9. 检测时必须用OD450吗?

CCK-8检测时的甲臜产物在430-490 nm之间都有光吸收,所以可以选择430-490 nm之间的其他检测波长,但是在450 nm时检


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