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产品编号 FY600017
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弗元生物,TUNEL试剂盒1折试用 试用产品:FY600017-20T 活动时间:2019年5月7日--2019年7月31日 数量有限,售完为止。 产品简介: 细胞在发生凋亡时,细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA,DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段,而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶)把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端,从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。 本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸,因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有:石蜡包埋组织切片,冰冻切片,贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。 被引用文献 乔文姝. 桦木酮酸-紫杉醇纳米药物体系构建及其抗乳腺癌活性[D].哈尔滨工业大学,2020. 肖博. 橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制[D].华北理工大学,2020. TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)
产品编号: FY600017-20T FY600017-50T 存储条件: -20 ℃避光保存,有效期12个月或更久; 若频繁使用可在4℃避光保存3个月。 避免反复冻融。 产品组分:
产品简介: 细胞在发生凋亡时,细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA,DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段,而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶)把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端,从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。 本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸,因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有:石蜡包埋组织切片,冰冻切片,贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。
自备耗材和设备: 1 ml 移液器 200 μl 移液器 20 μl 移液器 15 ml离心管 流式细胞仪 荧光显微镜 PBS PI或DAPI染色液(选做) 蛋白酶K(选做) 适用实验与操作过程: 1. 样本处理: 1.1 悬浮细胞(细胞悬液) a) 收集细胞,PBS洗涤一次。 b) 含1%甲醛的PBS或者4%多聚甲醛室温固定30分钟。摇床轻轻晃动防止细胞成团。 c) PBS再洗涤1次。 d) 含0.2% Triton X-100的PBS重悬细胞,室温孵育5分钟。 1.2 贴壁细胞(细胞爬片/涂片) a) PBS洗涤细胞1次。 b) 含1%甲醛的PBS4%多聚甲醛室温固定30分钟。 c) PBS洗涤1次。 d) 用含0.2% Triton X-100的PBS室温孵育5分钟。 1.3 冰冻切片 a) 4%多聚甲醛室温固定60分钟。 b) PBS洗涤2次,每次5分钟。 c) 含0.5% Triton X-100的PBS,室温孵育5分钟。或者用20 μg/ml的蛋白酶K室温作用15-30分钟(若用蛋白酶K通透处理,后续需用PBS洗涤2-3次,每次5分钟,将蛋白酶K漂洗干净)。 1.4 石蜡切片 a) 脱蜡:二甲苯脱蜡2-3次,每次5-10分钟。 b) 复水:用无水乙醇,90%乙醇,70%乙醇,蒸馏水依次浸泡,每次2-5分钟。 c) 滴加20 μg/ml 蛋白酶K室温处理15-30分钟。 d) PBS洗涤2-3次,每次5分钟,将蛋白酶K漂洗干净。 2. 配制TUNEL反应体系:
3. 流式细胞仪检测悬浮细胞或者细胞悬液: a) PBS洗涤细胞1-2次,每次5分钟。细胞沉淀中加入TUNEL反应液50 μl。37℃避光反应60分钟。 b) PBS洗涤2-3次,每次5分钟。 c) 选作:加PI或者DAPI染色液1 μl /ml,染细胞核。 d) 补加500 μl PBS,流式细胞仪检测。 4. 荧光显微镜检测细胞涂片或者细胞爬片或者组织切片: a) PBS洗涤1-2次,每次5分钟。 b) 加入TUNEL反应液50 μl。37℃避光反应60分钟。 c) PBS洗涤3次,每次5分钟。 d) 选作:加PI或者DAPI染色液1 μl /ml,染细胞核。 e) 荧光显微镜下观测并拍照。
1. 单个反应的细胞数量是多少? 流式细胞仪检测推荐细胞总数为3-5 × 106。对于细胞爬片或者涂片,推荐60-90%汇合度。对于常规组织的冰冻切片或者石蜡切片,推荐切片厚度为2-5 μm,避免切片太厚。 2. 是否需要避光? 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。 3. 细胞离心条件? 对于悬浮细胞或者细胞悬液,洗涤时候离心条件推荐为300 g、5分钟。 4. 细胞固定条件? 细胞样品固定可以用1%甲醛的PBS溶液或者4%的中性多聚甲醛。组织切片样品推荐用4%的多聚甲醛。 5. 细胞通透处理条件选择? 细胞样品通透推荐用0.2%的Triton X-100或者70%的预冷乙醇-20℃通透1-4小时。细胞样品可以在70%的乙醇溶液中-20℃保存1周。冰冻切片样品通透可以选择0.5%的 Triton X-100或者20 μg/ml的蛋白酶K。石蜡切片样本推荐用20 μg/ml的蛋白酶K进行通透处理。蛋白酶K做通透处理的时候,需要摸索通透时间,时间太短造成通透不彻底,时间太长容易脱片。。 6. 使用时需及时清洗流式细胞仪。 PI流式上机时具有一定的粘性,请及时清洗流式细胞仪,避免堵塞。连续上机数量过多也可能导致仪器堵塞导致数据误差,可在检测到一定数量的样本时进行次氯酸清洗,然后进行剩余样本的检测。
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